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白曲霉斜面菌種培養(yǎng)條件的優(yōu)化
研究報告
中國釀造
２０１０年第９期總第２２２期
?９３?
白曲霉斜面菌種培養(yǎng)條件的優(yōu)化
高林峰ｔ，湯慶莉?，吳天祥：?
（１．貴州大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，貴州貴陽５５０００３；２．貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州責(zé)陽５５００２５）
摘要：對麩曲醬香白酒生產(chǎn)所需糖化酶菌種：白曲霉的一級種培養(yǎng)工藝條件進(jìn)行單因素試驗，應(yīng)用Ｍｉｎｉｔａｂｌ５軟件設(shè)計了Ｐｌａｃｋ－ｃ葉－ｔ－Ｂｕｒｎｌａｎ篩選試驗，通過篩選得出蔗糖濃度、硫酸銨濃度、培養(yǎng)摹ｐＨ值以及微量元素配比為菌種生長的４個顯著性影響因素，并對此進(jìn)行正交試驗得出白曲霉一級種斜面培養(yǎng)的最優(yōu)條件為蔗糖濃度２５９／Ｌ，硫酸銨濃度３．５９／Ｌ，ＭｇＳＯ，?７Ｈ９９Ｋ２ＰＯ，１．０９／Ｌ，瓊Ｊ］．１５９／Ｌ，ｐＨ值５．５，培養(yǎng)溫度２８。Ｃ，菌體糖化酶活力７２４。８Ｕ／ｇ。關(guān)鍵詞：白曲霉：斜面培養(yǎng)；工藝優(yōu)化中圖分類號：０９３－－３３５
文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ
文章編號：０２５４—５０７１（２０１０）０９－００９３—０４
１．０９／Ｌ，ＫＣＩ！．０９／Ｌ，
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｌａｎｔｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｏｆｗｈｉｔｅＡｓｐｅｒＳｅ／ｍｓ
ＧＡＯＬｉｎｆｅｎ９１，Ｔａｎｇ
Ｑｉｎｇｌｉｌ，ＷＵＴｉａｎｘｉ蛆９２．
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕｉｚ凼ｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｌｙ，Ｇｕｉｙａｎ９５５０００３，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｓｃｈｏｏｌｏｆｈ＇ｆｅｓｃＪｃｌＪＣＣ￥，Ｇｕｉｚｈｏｕ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｐｌａｙｓ
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Ｕｎｉｖｅｒｓｉ（ｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ
５５００２５，國ｉｎａ）
ｉｍｐｏｒｔａｎｔｍｌｅｏｆｓａｃｃｈａｒｉｆｉｃａｆｉｏｎｉｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅｌｉｑｕｏｒ．Ｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｌａｎｔｃｕｌｔｕｒｅ
ｔｅｓｔ
ｍｅｄｉｕｎｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒｓ
ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ．ＴｈｅＰｌａｅｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ
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ｅｘｐｅｒｉｍｃｍＷａＳｄｅｓｉｇｎｅｄｂｙｓｏｆｔｗａｒｅｏｆＭｉｒａ＇ｔａｂ１５．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｆｏｒ－
ｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｃｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｆｏｌｌｏｗｅｄ：ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅ
２５班，ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｍｍｏｎｉｕｍｓｕｌｆａｔｅ
ａｃ－
３．５嘰，ＭｇＳＯ，－７Ｈ：，‘９１．０班，ＫＣｌ１．０嘰Ｋ，ＰＯ（１．０班，ｍｅｄｉｕｍｐＨｖａｌｕｅ５．５
ｔｉｖｉｔｙｏｆｇｌｕｃｏａｍｙｌａｓｅｗａｓ７２４．８Ｕ／ｇ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｗｈｉｔｅＡｓｐｅｒｇｉ．ｕｓ，ｓｌａｎｔｃｕｌｔｕｒｅ，ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ
ａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ２８℃．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ
醬香型白酒的傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝是以高溫大曲為糖化發(fā)酵劑，以高粱為原料生產(chǎn)的。貴州茅臺酒是其典型代表。但由于該工藝生產(chǎn)周期長、糧耗高、產(chǎn)量低資金周轉(zhuǎn)慢、成本高。從而導(dǎo)致醬香型白酒市場價格相對偏高，不能滿足不同層次消費的需求【”。應(yīng)用純種微生物制成麩曲，生產(chǎn)醬香型白酒，成為醬香型白酒生產(chǎn)的另一種途徑，經(jīng)研究其糧耗大幅下降、生產(chǎn)周期明顯縮短，酒質(zhì)基本達(dá)到大曲醬香的要求【習(xí)。麩曲白酒質(zhì)量的優(yōu)劣，取決于麩曲和酒母的質(zhì)量這與選育菌種關(guān)系重大，要求麩曲應(yīng)最大限度地將淀粉分解成可發(fā)酵性糖，應(yīng)具有較高的淀粉酶及糖化酶的活力網(wǎng)。在釀酒工業(yè)中，生產(chǎn)麩曲白酒等酒類時白曲霉可作為糖化劑，這是因為白曲霉中的糖化酶可以將淀粉水解為葡萄糖，進(jìn)而被微生物發(fā)酵產(chǎn)生酒精１４】，白曲霉斜面試管培養(yǎng)基的好壞可直接影響到酒質(zhì)的優(yōu)劣。因此本試驗通過對白曲霉斜面試管培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，以麩曲糖化
收稿日期：２０ＬＯ－０５．１１
酶的活力作為檢測指標(biāo)，探索白曲霉糖化酶活力最高時的培養(yǎng)條件。１材料與方法１．１菌種
白曲霉：購于四川微生物菌種保藏中心。１．２培養(yǎng)基
斜面培養(yǎng)基：葡萄糖３０９，ＮａＮ０３３９，ＭｇＳ０４?７Ｈ２０
ＫＣｌ
０．５９，
０。５９，Ｋ２Ｐ０４ｌｇ，瓊脂１５９，蒸餾水１０００ｍＬ，ｐＨ值自然。固體培養(yǎng)基：２５０ｍＬ三角瓶裝Ａ２５９含水率為６５％的
麩皮，恰好可以覆蓋瓶底，０．１ＭＰａ滅菌３０ｍｉｎ。１．３培養(yǎng)方法
斜面培養(yǎng)：從活化好的母種試管中挑取黃豆大的菌絲塊，接入斜面，在２８℃培養(yǎng)４ｄ。
固體培養(yǎng)：從斜面試管中挑取３塊黃豆大小的菌絲塊接入固體培養(yǎng)基，拌勻。培養(yǎng)溫度為２８℃，剛開始為堆積培
基金項目：貴州省貴陽市科技局工業(yè)攻關(guān)項目（［２００９］筑科２合同字第１－０５７號）
作者簡介：高林峰（１９８５－），男，山東濟(jì)南人，碩士研究生，研究方向為發(fā)酵工程；吳天祥?，教授，通訊作者．
條件，均質(zhì)為６０℃、３０ＭＰａ條件下均質(zhì)２次，１２１℃殺菌５ｍｉｎ。經(jīng)單因素試驗及正交試驗確定其最佳穩(wěn)定劑配方為單甘酯０．２％，黃原膠０．０５％，羧甲基纖維素鈉０．１２％，蔗糖酯０．１％。制得的產(chǎn)品流體均一，色澤乳白，可穩(wěn)定保存。經(jīng)過上述工藝加工的巴旦木蛋白飲料符合國家飲料生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，保質(zhì)期可達(dá)１２個月。
參考文獻(xiàn)：
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萬方數(shù)據(jù)
２０１０ＮＯ．９
?９４?
ＳｅｒｉａｌＮｏ．２２２
ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇ
養(yǎng)，２０ｈ后將培養(yǎng)基混勻平攤在瓶底，２４ｈ后培養(yǎng)結(jié)束。１．４檢測方法
１．４．１糖化酶的測定方法嗍
（１）麩曲液的制備：稱取５９麩曲，加入１００ｍＬ蒸餾水浸泡ｌｈ。
（２）�。�、Ｂ２個三角瓶，Ａ瓶加入２０ｍＬ蒸餾水，Ｂ瓶加入２０ｍＬ２％淀粉溶液（準(zhǔn)確稱取絕干的可溶性淀粉２９，用
少量的水調(diào)勻，倒入７０ｍＬ的沸水中，并用２０ｍＬ水反復(fù)洗滌小燒杯，洗液合并其中，用微火煮沸到透明，冷卻后用水定容至１００ｍＬ，當(dāng)天配制使用）。
（３）向Ａ、Ｂ２個三角瓶中各力ｇＸＳｍＬ、ｐＨ４．６７，酸一乙酸鈉緩沖液（２ｍｏｌ／Ｌ乙酸溶液：�。保保福恚瘫宜嵊盟♂屩粒保蹋c２ｍｏＶＬ乙酸鈉溶液：稱�。玻罚玻挂宜徕c溶于水并稀釋至ｌＬ，等體積混合即可），然后分別加入５ｍＬ浸泡好的麩曲液。
（４）置于３０℃水浴鍋反應(yīng)６０ｍｉｎ后加入３ｍＬｌｍｏｌ／ＬＮａＯＨ終止反應(yīng)。
（５）取２個新的三角瓶Ｃ、Ｄ盼別加入斐林甲一乙液各５ｍＬ，
從反應(yīng)后的Ａ、Ｂ２瓶中各取５ｍＬ力ｎ入，在電爐上加熱。在沸騰條件下用ｌｇ／Ｌ葡萄糖溶液進(jìn)行滴定，直至藍(lán)色消失記錄所用葡萄糖液的體積Ｖ。、Ｖ：。
（６）糖化酶活力（Ｕ，妒＝（Ｖ。．Ｗｘ９６
１．４．２培養(yǎng)條件優(yōu)化
對碳源、氮源的選定以及對選定后的碳源、氮源的質(zhì)量濃度、微量元素配比、培養(yǎng)時間和培養(yǎng)基Ｐｈ值進(jìn)行單因素試驗。利用Ｍｉｎｉｔａｂｌ５軟件設(shè)計了５因素２水平的Ｐｌａｃｋ－ｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ篩選試驗，從中找出對菌體生長的顯著性因素并進(jìn)行正交試驗對其優(yōu)化。２結(jié)果與討論２．１單因素試驗２．１．１碳源、氮源的選擇
（１）碳源的選擇：分別用３０９／Ｌｌ｝勺蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、玉米粉來代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖，其他條件均不變進(jìn)行試驗，結(jié)果見圖１。
６００
蠶５００
ｏ４００
雜３００
蜒
避２００
＿
糖１００
Ｏ
ｆ－淀粉蔗糖葡萄糖麥芽糖玉米粉
圈一圈－Ｌ．－圈．－１－一＿．１－．Ｉ．Ｊ
碳源
圖１
不同碳源對菌體糖化酶活力的影響
Ｆｉｇｕｒｅ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｒｂｏｎ
ｓｏｕｒｃｅｏｎ
ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓａｃｃｈａｒｉｆｙｉｎｇ
ｅｎｚｙｍｅ
萬方數(shù)據(jù)
碳源是白曲霉乃至任何微生物生長能量代謝的來源，不同的碳源對菌體生長均有不同的影響，由圖ｌ可以明顯看出，蔗糖對菌種產(chǎn)糖化酶的影響最大，而且蔗糖的價格適宜，故選蔗糖作為斜面培養(yǎng)的碳源。
（２）氮源的選擇：用３班的尿素、碳酸氫銨、酵母膏、硫
酸銨和蛋白胨來代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的硝酸鈉，其他條件不變進(jìn)行試驗，結(jié)果見圖２。
５
４４
３３２
●●
硝酸鈉尿素碳酸氡銨酵母臂蛋白胨硫酸銨
氮源的種類
圖２不同氮源對菌體糖化酶活力的影響
Ｆｉｇｕｒｅ２．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎ
ｓｏｕｒｃｅｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｎｙｏｆ
ｓａｃｃｈａｒｉｉｙｉｎｇｅｎｚｙｍｅ
氮源是構(gòu)成菌體成分的主要物質(zhì)，不同的氮源對菌體的生長及糖化酶的活力的影響也不一樣。由圖２可以明顯看出，白曲霉對酵母膏和硫酸銨的利用率較高，并且考慮到經(jīng)濟(jì)因素以及試驗操作的因素，故選擇硫酸銨作為菌種斜面培養(yǎng)的最佳氮源。�。保蚌a卜Ｓ０９／Ｌ不同濃度的蔗糖加入到斜面培養(yǎng)基當(dāng)中，其他的條件保持不變，觀察對菌體生長的影響，試驗結(jié)果（圖３）可以明顯看出，白曲霉產(chǎn)糖化酶活力隨糖濃度的增加而增加，當(dāng)蔗糖濃度為３０９／Ｌ時達(dá)到最佳。
７００
玉６００
ｏ
５００
、４００
Ｒ
蜒３００
塞２００
囊１００
蔗糖濃度“ｇ?Ｌ‘‘）
圖３蔗糖濃度對菌體生長的影響
Ｆｉｇｕｒｅ
３．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｕｃｒｏｓｅｏｒｌ
ｔｈｅａｃｔｉｖｎｙｏｆｓａｃｃｈａｒｉｆｙｉｎｇｅｎｚｙｍｅ
取ｌｇ／Ｉ一５９／Ｌ不同濃度的硫酸銨ｔＪｎＡ，斜面培養(yǎng)基當(dāng)中，其他條件保持不變，觀察對菌體生長的影響，試驗結(jié)果（圖４）可以明顯看出，白曲霉產(chǎn)糖化酶的活力隨硫酸銨的濃度增加而增加，當(dāng)硫酸銨的濃度為３９／Ｌ時達(dá)到最佳。
２．１．２碳源濃度對菌體生長的影響
２．１．３氮源濃度對茵體生長的影響
中國釀造
２０１０年第９期研究報告
ｆ
ｂｏ
●
√
）長蛭避ｇ耀
硫酸銨濃度／（ｇ?Ｌ。）
圖４硫酸銨濃度對菌體生長的影響
Ｆｉｇｕｒｅ４．Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｍｍｏｎｉｕｍｓｕｌｆａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｌｌ
ｔｈｅ
ａｃｔ脯ｙ
ｏｆ
ｓａｃｃｈａｄｆｙｉｎｇｅｎｚｙｍｅ
微生物的生長都需要在適宜的酸堿環(huán)境下，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的ｐＨ值為４、５、６、７、８，其他條件保持不變，觀察對菌體生長的影響，結(jié)果（圖５）可以明顯看出，在ｐＨ值為６時菌體糖化酶的活力最高，故選擇培養(yǎng)基的ｐＨ值為６。
ｏ
ｋ
●
ｏ
、－，
Ｒ蜒潼基瓣
ｐＨ值
圖５
ｐＨ值對菌體生長的影響
Ｆｉｇｕｒｅ５．ＥｆｆｅｃｔｏｆｐＨｖａｌｕｅｏＮ
ｔｈｅａｃｔｉｖｎｙｏｆｓａｃｃｈａｒｉｆｙｉｎｇｅｎｚｙｍｅ
２．１．５培養(yǎng)時間對菌體生長的影響
ｏ
ｈ
●
ｏ
—Ｒ蜒滋Ｓ舞
培養(yǎng)時間／ｄ
圖６培養(yǎng)時間對菌體生長的影響
Ｆｉｇｕｒｅ６．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅ
ｏｌｌ
ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓａｃｃｈａｒｉｆｙｉｎｇ
ｅｎｚｙｍｅ
分別選擇２ｄ√ｏｄ作為培養(yǎng)時間，通過檢測糖化酶活力的大小來確定培養(yǎng)時間，結(jié)果（圖６）可以看出，隨時間的高，但隨后隨著菌體的老化糖化酶的活力逐漸降低，故選
萬方數(shù)據(jù)
總第２２２期
?９５－
擇４．５ｄ為培養(yǎng)時間。
２．１．６微量元素配比對菌體糖化酶活力的影響
Ｍｇ、Ｋ、Ｐ元素作為培養(yǎng)基中的微量元素，雖然需要的量很少但是對微生物來講卻也是必不可少的。試驗將ＭｇＳ０４、ＫＨ２ＰＯ，按照ｌ：ｌ、１：２、ｌ：３的比例進(jìn)行組合，試驗結(jié)果（圖７）可以看出，當(dāng)ＭｇＳＯ。：Ｋ．Ｈ：Ｐ０３為１：ｌ且均為１．０９／Ｌ時糖化酶的活力最高。
５００
０．５＋０．５０．５＋１．０Ｏ．５＋１．５１．ｏ十１．０１．ｏ＋２，０１．ｏ＋３．０
ＭｇＳ０４＋ＫＨ２ＰＯｄ（ｇ?Ｅ。）
圖７微量元素配比對菌體生長的影響
７．Ｅｆｆｅｃｔｏｆ
ｔｒａｃｅ
ｅｌｅｍｅｎｔｒａｔｉｏｓ０１１
ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓａｃｃｈａｒｉｆｙｉｎｇ
ｅｎｚｙｍｅ
表１各因素所選水平
Ｔａｂｌｅ１．ＳｅｌｅｃｔｅｄＩｅｖｅＩｓ‘
ｏｆｖａｒｉｏｕｓｆａｃｔｏｒｓ
水平搟參搿群Ｌ籬－州值搋
”。
度／（ｇ?Ｌ．１）
問／ｄ
度／（ｇ?１）
Ｐ１１咀索配比
高水平（１）
３５４
４．５
６．５
１．２５：１．２５
低水平（．Ｉ）
２５
表２Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ設(shè)計矩陣及試驗結(jié)果
Ｔａｂｌｅ２．ＤｅｓｉｇｎｍａｔｒｉｘｏｆＰｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎａｎｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓ
試驗號
蒙藿
培養(yǎng)時間ｐＨ
微差黿素‘焉繁ｖ／（ｕ．ｇ．１）
．．
１
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－
５
●２．
．
９３４５
－
；１
－
５
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ｉ
＿
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ｌｌ
８６１１．
１６
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ｉ｝６５８ｍ
－－●
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－
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－
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．
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ｉ
ｌ１
ｌ
試驗根據(jù)碳源濃度、氦源濃度、培養(yǎng)基ｐＨ值、培養(yǎng)時間和微量元素配比的單因素試驗結(jié)果，設(shè)計了ｎ＝１２的２．１．４培養(yǎng)基ｐＨ值對菌體生長的影響
Ｆｉｇｕｒｅ２．２顯著性因素的篩選
Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ篩選試驗，每個因子取高“１）低（．１）２個水平（例如培養(yǎng)基ｐＨ值為６時最高，取高水平為６．５，低水平為５．５）。以糖化酶的活力大小為響應(yīng)面的Ｙ值，試驗因素水平見表ｌ，結(jié)果見表２，各因素的效應(yīng)評價及系數(shù)估計見表
增加糖化酶的活力逐漸的升高，當(dāng)４．５ｄ時糖化酶的活力最
２０１０Ｎｏ．９
?９６?
ＳｅｒｉａｌＮｏ．２２２
ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ３。若ｐ＜Ｏ．０５說明該因素是顯著性因素，對菌體的生長有著顯著性的效果。由表３可以明顯的看出，除了培養(yǎng)時間以外，蔗糖濃度、ｐＨ值、微量元素配比和硫酸銨濃度均對菌體生長有顯著性影響。
裹３各因素效應(yīng)與系數(shù)估計
Ｔａｂｌｅ３．Ｆａｃｔｏｒｅｆｆｅｃｔａｎｄｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ
２．３正交試驗分析
根據(jù)顯著性試驗篩選出的４種顯著性因子進(jìn)行正交試驗分析，試驗采用的是ｋ（３０正交試驗，各因素選取水平見表４，試驗結(jié)果及分析見表５，方差分析見表６。
表４優(yōu)化菌體生長條件正交試驗因素水平
Ｔａｂｌｅ４．ＬｏｖｏＩｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｆａｃｔｏｒｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ
水平”。
Ａ孳蔓？粵ｃ（ｇ?Ｌ１）
Ｂ硫甓孽饕度／（２?Ｌ’‘）
。ｐ１８ｐＨ值Ｄ微量元素配比�！保怠埃浮啊埃欤玻担常担担担埃罚担海埃罚担玻常埃矗叮保埃埃海保铮铮�
３５
４．５
６．５
１．２５：１．２５
表５優(yōu)化菌體生長條件正交試驗數(shù)據(jù)及結(jié)果分析
Ｔａｂｌｅ
５．Ｒｅｓｕｌｔｓａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ試驗號
ＡＢ
ＣＤ糖化酶活力／（Ｕ?ｇ－１）
ｌｌ１
ｌｌ５３４２１．２２２５１８３ｌ’３３３５０９４２ｌ２３４８０５２２３ｌ４７０６２３’１２４７９７３ｌ３２４６１８３２ｌ３４３７９
３３２ｌ４４３
均值ｌ５２０．３３３４９１．６６７４８３．３３３４８２．３３３均值２４７６．３３３４７５．０００４８０．３３３４８６．０００均值３４４７．３３３４７７．０００４８０．３３３４７５．３３３極差
７３．０００
１６．６６７
３．３３３
１０．６６７
由正交試驗結(jié)果可以看出，對菌體生長的最大因素為蔗糖的濃度，其次為微量元素配比培養(yǎng)基ｐＨ值及硫酸銨濃度。４個因素的最佳組合應(yīng)該是Ａ。Ｂ．Ｃ。Ｄ：，即蔗糖濃度為２５９／Ｌ，硫酸銨濃度為３．５９／Ｌ，ＭｇＳ０４?７Ｈ２０１．ｏ＃－，ＫＣＩ１．０９／Ｌ，Ｋ２Ｐ０４１．０９／Ｌ瓊脂ｌＳｇ／Ｌ，ｐＨ值為５．５。按照所得出的
萬方數(shù)據(jù)
Ｒｅｐｏｒｔ
培養(yǎng)基最佳組合進(jìn)行試驗，并取２個水平，計算其平均值，最后得到菌體糖化酶的活力為７２４．８Ｕ／ｇ。
褒６正交試驗方差分析
Ｔａｂｌｅ６．Ｖａｒｉａｎｃｅ
ａｎａｌｙｓＩｓｏｆｈｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
３結(jié)果分析
傳統(tǒng)的大曲醬香型白酒生產(chǎn)，工藝復(fù)雜，生產(chǎn)周期長，
耗糧高，對自然氣候條件要求奇刻。近年來，發(fā)展較快的麩曲醬香型酒生產(chǎn)工藝，具有簡化工藝、降低消耗，縮短周期的特點使得純種麩曲發(fā)酵為醬香型白酒發(fā)展的新途徑嘲。白曲霉為麩曲發(fā)酵的糖化劑，可以將原料中的淀粉分解成菌體生長所需要的糖，其糖化酶的活力大小對麩曲白酒的產(chǎn)酒率以及白酒的質(zhì)量有著重要的影響，因此本實驗以糖化酶的活力大小作為驗證菌體生長好壞的考察指標(biāo)。
通過單因素試驗對自曲霉斜面培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，確定蔗糖為培養(yǎng)基碳源，硫酸銨為培養(yǎng)基氮源。通過Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ篩選試驗對蔗糖濃度、硫酸銨濃度、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基ｐＨ值、微量元素配比進(jìn)行篩選確定蔗糖濃度、硫酸銨濃度、培養(yǎng)基ｐＨ值、微量元素配比為菌種生長的顯著性因素。
對４組顯著性因素進(jìn)行Ｌ９（３４）進(jìn)行正交試驗，得到菌體生長培養(yǎng)條件的最佳配比為蔗糖濃度為３０９／Ｌ，硫酸銨濃度為３．Ｓｇ／Ｌ，ＭｇＳ０４?７Ｈ２０
１．０９／Ｌ，ＫＣＩ１．０９／Ｌ，Ｋ２Ｐ０４
１．０９／Ｌ，瓊）指１５９／Ｌ，ｐＨ值為５．５。在此培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)可以明顯的提高茵體糖化酶的活力，活力值可以達(dá)到７２４．８Ｕ／ｇ。完全符合白曲霉作為發(fā)酵糖化劑的作用，對以后麩曲白酒的發(fā)酵產(chǎn)酒具有指導(dǎo)意義。參考文獻(xiàn)：
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