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生物技術(shù)制藥
題型與期中考試一樣，名詞解釋五個(gè)，單選15個(gè)，填空10個(gè)。簡答5個(gè)，論述題一個(gè) 期中卷子很多題目都是重點(diǎn)，要認(rèn)真看。
第一章 緒論
論述題：：期中考試最后一題
第二章 基因工程制藥
1， 將所要重組的目的基因插入載體，拼接，轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞，
構(gòu)建成工程菌或者細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的技術(shù)。
2， 基因工程藥物制備的基本過程是：獲得母的基因---組建重組質(zhì)粒---構(gòu)建基因工程菌
（或者細(xì)胞）---培養(yǎng)工程菌---產(chǎn)物的分離純化---除菌過濾----半成品的檢定—成品的檢定---包裝
3， 目的基因的獲得三種方法：（1）反轉(zhuǎn)錄法（2）反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）
（3）化學(xué)合成法。
其中要掌握，反轉(zhuǎn)錄法中信使RNA的純化原理：由于真核細(xì)胞中信使RNA3,末端常含有Poly A,，流經(jīng)寡聚dT柱，被特異性的結(jié)合，再用低鹽溶液洗脫下來。得純度較高的信使RNA。RT-PCR方法中要掌握其方法步驟是：變性、退火、延伸、再重復(fù)�；瘜W(xué)合成法中主要限制是：不能合成太長的基因，同時(shí)費(fèi)用較高、
4， 基因表達(dá)的宿主可以分為真核細(xì)胞（包括酵母。絲狀真菌）和原核細(xì)胞（包括大腸
桿菌，枯草芽孢桿菌，鏈霉菌）。
5， 重組工程菌的培養(yǎng)：1.分批培養(yǎng)（1）DO-Stat方法（2）Blanced DO-Stat方法（3）
控制菌體比生長速率方法2、補(bǔ)料分批培養(yǎng)3、連續(xù)培養(yǎng)4、透析培養(yǎng)5、固定化培養(yǎng)(簡答題)
6， 重組蛋白質(zhì)的分離純化：主要依賴的是色譜分離方法，P50--60要掌握一下方法和
原理、優(yōu)缺點(diǎn)！比如離子交換層析（原理是根據(jù)目的蛋白的電荷大�。�，親和層析，凝膠過濾層析（原理是根據(jù)目的蛋白的相對分子量，該方法耐壓，分離效率高，但是不耐高離子強(qiáng)度），反相色譜
第三章
7/、離體培養(yǎng)動物細(xì)胞的類型：（要掌握的是三個(gè)黑體的概念，考三者之一）（1）原代細(xì)胞（是指直接取自動物組織器官，經(jīng)過粉碎、消化而獲得的細(xì)胞懸液）、（2）二倍體細(xì)胞系（是指元代細(xì)胞經(jīng)過傳代，篩選、克隆，從而沖隊(duì)中細(xì)胞成分的組織中挑選并純化出某種具有一定特征的細(xì)胞株、特點(diǎn)：二倍體；有明顯的貼壁和接觸抑制特性；有限的增殖能力；無致瘤性）、（3）轉(zhuǎn)化細(xì)胞系（ 通過轉(zhuǎn)化形成，變成了異倍體，有無限增殖能力如：Vero。）（4）融合細(xì)胞系（掌握融合的方法：仙臺病毒融合法、聚乙二醇(又曰PEG)融合法、電融合法(5)基因工程細(xì)胞系
8、常用的細(xì)胞的特性，經(jīng)典的例子：Namalwa細(xì)胞，是從淋巴瘤的患者體內(nèi)獲取的，用于生產(chǎn)干擾素。Vero從非洲綠猴腎中分離，貼壁依賴的成纖維細(xì)胞，用于制備疫苗。
9．、動物細(xì)胞的培養(yǎng)條件：動物細(xì)胞最適合的pH值為7.2～7.4。哺乳動物細(xì)胞的最佳培養(yǎng)溫度為：(37±5)℃、昆蟲細(xì)胞：27℃。小牛血清5%---10%- (包括胎牛血清10%---20%)
10、細(xì)胞分離：常用的分離方法是酶消化法。
11、細(xì)胞計(jì)數(shù)：掌握血球計(jì)數(shù)法，為了判斷細(xì)胞的死活，我們使用的染料是臺盼藍(lán)和苯胺黑。重點(diǎn)掌握的是：MTT染色計(jì)數(shù)法。它的原理是活細(xì)胞中的線粒體脫氫酶能將淡黃色的MTT轉(zhuǎn)變成紫色的結(jié)晶沉淀，吸走的液體，把結(jié)晶放入脫色液（DMSO）有機(jī)溶劑中脫色，其色澤的深淺和活細(xì)胞的量 在590nm下比濁得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)
曲線求得相應(yīng)比濁下的細(xì)胞數(shù)。（簡答）
12、細(xì)胞凍存和復(fù)蘇：慢凍速溶。
13、理想微載體的條件：（1）微載體表面性質(zhì)與細(xì)胞有良好的相容性（2）無毒（3）材料是惰性的（4）比重合適（5）良好的光學(xué)透明性，最好是軟體的（6）耐高溫，能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌（7）原料廉價(jià)剪片可反復(fù)使用。（簡答）
37、包埋細(xì)胞的載體材料分三類：（1）人工合成的高分子聚合物（2）糖類（3）蛋白質(zhì)
14、動物細(xì)胞的生物反應(yīng)器：五種：機(jī)械攪拌生化反應(yīng)器、氣升式生物反應(yīng)器、中空纖維管生物反應(yīng)器、透析袋或者膜式反應(yīng)器、固定床式生物反應(yīng)器（填空或者選擇題）
第四章 抗體制藥
15、單克隆抗體的概念和原理： 概念：只識別一種表位(抗原決定簇)的抗體，來自單個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞的克隆或一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的克隆。原理：B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細(xì)胞的這種能力和量是有限的，不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價(jià)、單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。
細(xì)胞二者的融合方法是PEG融合方法。用HAT培養(yǎng)基（成分是：次黃嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脫氧核苷（thymidin））
16、人-鼠嵌合抗體是指在基因水平上將小鼠的Ig可變區(qū)與人的Ig恒定區(qū)嵌合在一起 人改型抗體是指用鼠單克隆抗體V區(qū)的人源化 ，
小分子抗體包括：Fab與Fv抗體、單鏈抗體、單域抗體
17、噬菌體抗體庫技術(shù)的特點(diǎn)：⒈模擬天然全套抗體庫
⒉避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)
⒊可獲得高親和力的人源化抗體
18、基因工程抗體表達(dá)的方式：
⒈原核細(xì)胞表達(dá)
⒉真核細(xì)胞表達(dá)
⒊轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)
⒋轉(zhuǎn)基因動物表達(dá)
19、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑：熒光抗體診斷試劑、免疫酶抗體診斷試劑、放射免疫用抗體診斷試劑
第五章 植物細(xì)胞制藥
20.是指植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發(fā)育成完整植株的遺傳能力。
21、外植體：用于植物組織（細(xì)胞）培養(yǎng)的器官或組織（的切段），植物的各部位如根、莖、葉、花、果、穗、胚珠、胚乳、花藥和花粉等均可作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng), 誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。
38、培養(yǎng)植物細(xì)胞過程中，生物量積累最大的是對數(shù)期，次級代謝產(chǎn)物最多的是穩(wěn)定期
22、植物細(xì)胞與動物細(xì)胞的三大區(qū)別：葉綠體，液泡，細(xì)胞壁、
23、初級代謝產(chǎn)物：比如激素、次級代謝產(chǎn)物：比如多糖、
25、氮常以銨鹽或硝酸鹽形式提供
碳源分為二種：光自養(yǎng)培養(yǎng)物的是二氧化碳。異養(yǎng)培養(yǎng)物的主要是糖類。
26、兩步培養(yǎng)法： 第一步使用適合細(xì)胞生長的培養(yǎng)基，營養(yǎng)豐富；第二步使用適于次級代謝產(chǎn)物合成的培養(yǎng)基，較低含量的硝酸鹽和磷酸鹽，并含有較低的糖分或少量的碳源。（第一個(gè)用于細(xì)胞生物量的累積，第二個(gè)用于次級代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)）（簡答）
27、植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器 1機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器2鼓泡塔生物反應(yīng)器3氣升式生物反應(yīng)器4轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器（最優(yōu)）5固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器（培養(yǎng)時(shí)考慮剪切力的影響，最終目的是得到次級代謝產(chǎn)物）
28、前提飼喂是增加次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)率的方法，依賴于三種結(jié)構(gòu)單位：1莽草酸2氨基酸3乙酸
第六章 酶工程制藥
29、固定化酶：是指限制或固定于特定空間位置的酶，具體是指經(jīng)物理或者化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動受到限制，而又能發(fā)揮酶催化作用的酶制劑。
30、酶固定化方法可以分為三種：載體結(jié)合法（包括物理吸附法、離子結(jié)合法、共價(jià)結(jié)合法）、交聯(lián)法、包埋法（包括網(wǎng)格型和微囊型）。交聯(lián)法用的交聯(lián)劑試劑是戊二醛
31、固定化細(xì)胞：是指被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞。
32、：是指根據(jù)酶的作用原理，人工的合成具有酶性質(zhì)的催化劑，必須有一個(gè)底物結(jié)合的位點(diǎn)和一個(gè)催化位點(diǎn)。
33、模擬酶中最具有典型代表性的是環(huán)糊精。
第七章 發(fā)酵工程技術(shù)
34、發(fā)酵后工業(yè)的生產(chǎn)水平取決于三個(gè)要素：生產(chǎn)軍中，發(fā)酵工藝，發(fā)酵設(shè)備。
35、發(fā)酵的基本過程是：菌種—種子制備—發(fā)酵---發(fā)酵液的預(yù)處理---提取精制
36、谷氨酸生產(chǎn)中使用的菌種是：谷氨酸棒狀桿菌。
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