紅系分化相關(guān)基因相互作用蛋白質(zhì)的分離與鑒定

目的 制備紅系分化相關(guān)基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)蛋白的單克隆抗體,利用免疫沉淀聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)對EDAG相互作用蛋白質(zhì)進行分離與鑒定.方法 構(gòu)建EDAG原核表達載體,通過誘導、表達、純化獲得EDAG融合蛋白,雜交瘤技術(shù)建立分泌EDAG單克隆抗體的雜交瘤細胞株,利用Western印跡篩選陽性雜交瘤細胞,免疫小鼠得腹水,最后用免疫共沉淀與質(zhì)譜聯(lián)合鑒定EDAG相互作用蛋白.結(jié)果 純化獲得EDAG重組蛋白,篩選出4株分泌EDAG單克隆抗體的雜交瘤細胞株,并制備了腹水.該抗體均可用于內(nèi)源EDAG蛋白的檢測,其中兩種抗體可用于免疫共沉淀實驗,運用質(zhì)譜技術(shù)篩選獲得EDAG候選相互作用蛋白.結(jié)論 利用EDAG單克隆抗體,篩選到EDAG候選相互作用蛋白質(zhì)13種,涉及細胞增殖及轉(zhuǎn)錄等過程,為EDAG的功能研究及其分子機制的闡明提供了新的線索.

作 者： 徐誠望 王治東 李長燕 許望翔 詹軼群 于淼 楊曉明 XU Chengwang WANG Zhidong LI Changyan XU Wangxiang ZHAN Yiqun YU Miao YANG Xiaoming   作者單位： 軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所北京市,100850  刊 名： 醫(yī)學分子生物學雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2008 5(4)  分類號： Q71  關(guān)鍵詞： 單克隆抗體   免疫共沉淀   質(zhì)譜   相互作用蛋白質(zhì)  

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