采用SEREX方法從cDNA表達文庫中篩選大腸癌抗原基因

目的 尋找人源性大腸癌特異性抗原基因.方法 采用SMART技術構建人大腸癌組織來源的eDNA噬菌體表達文庫,以自體或異體大腸癌患者血清按SEREX方法進行免疫篩選,對平板法擴增獲得的陽性克隆片段導人克隆載體PUCm-T后進行測序、鑒定和BLAST同源性比較,并根據cDNA序列進行生物信息分析.結果 構建了3個大腸癌抗原cDNA噬菌體表達文庫,其滴度分別為2.39×106 pfu/mL、2.07 × 106 pfu/mL和1.86×106 pfu/mL,插入片段長度為0.5～4 kb,平均分別為1.4、1.6和1.3 kb,重組率最高達到97.5%.選擇高滴度文庫擴增后滴度達到4.1×1010 pfu/mL.SEREX篩選共獲得16個陽性克隆,代表12個不同抗原基因,其中10個基因片段為已知抗原基因,如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等,2個為未知EST片段.根據序列分析,篩選出的抗原基因有結構基因、調節(jié)基因、代謝相關基因等.結論 利用SEREX方法篩選出大腸腫瘤相關抗原基因并獲得2個腫瘤抗原候選基因.

作 者： 肖冰 劉宇虎 何敬東 賴卓勝 張振書 XIAO Bing LIU Yuhu HE Jingdong LAI Zhuosheng ZHANG Zhenshu   作者單位： 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院消化科,廣東,廣州,510515  刊 名： 胃腸病學和肝病學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY  年，卷(期)： 2008 17(4)  分類號： Q343.1  關鍵詞： 結直腸腫瘤   血清學篩選技術   抗原基因   cDNA表達文庫  

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