Bcl-2基因轉(zhuǎn)染對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外模擬缺血性損傷保護(hù)作用的實驗研究

目的 觀察Bcl-2基因轉(zhuǎn)染對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外模擬缺血性損傷的保護(hù)作用,從而為下一步Bcl-2基因修飾的MSCs移植治療腦缺血的實驗研究奠定基礎(chǔ).方法 采用密度梯度離心結(jié)合貼壁法分離、培養(yǎng)大鼠MSCs,對培養(yǎng)第5代的MSCs進(jìn)行鑒定;用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對MSCs行人Bel-2(hBcb2)基因轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染后用G418進(jìn)行篩選,然后用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測其蛋白的表達(dá);采用血清剝奪和缺氧(SOD)處理建立MSCs體外模擬缺血性損傷模型,通過流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測評價轉(zhuǎn)染hBcl-2基因的MSCs和未轉(zhuǎn)染的MSCs的凋亡及存活情況.結(jié)果 密度梯度離心結(jié)合貼壁法能有效分離、純化大鼠MSCs,免疫組化檢測顯示培養(yǎng)的細(xì)胞CD44、CD71表達(dá)陽性,而CD45表達(dá)陰性;轉(zhuǎn)染hBcl-2基因的MSCs經(jīng)G418篩選后有hBd-2蛋白的穩(wěn)定、高效的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示和MSCs相比,轉(zhuǎn)染hBcb2基因的MSCs在SOD后及9h凋亡細(xì)胞較少,存活細(xì)胞較多.TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測也顯示轉(zhuǎn)染hBcl-2基因的MSCs的凋亡明顯減少(P<0.05).結(jié)論 轉(zhuǎn)染hBcl-2基因的MSCs有其蛋白的穩(wěn)定表達(dá),hBcl-2基因轉(zhuǎn)染可對抗MSCs體外模擬缺血性損傷引起的細(xì)胞凋亡,從而具有保護(hù)性作用.

作 者： 張小喬 梅元武 張紅 鄭麗芳 郭遠(yuǎn)瑾 徐江華   作者單位： 張小喬(鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科)

梅元武,張紅,鄭麗芳,郭遠(yuǎn)瑾,徐江華(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,武漢,430022) 

刊 名： 卒中與神經(jīng)疾病  ISTIC 英文刊名： STROKE AND NERVOUS DISEASES  年，卷(期)： 2008 15(3)  分類號： Q813 R743  關(guān)鍵詞： Bcl-2   基因轉(zhuǎn)染   骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞   缺血性損傷   保護(hù)作用  

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