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人免疫缺陷病毒早期蛋白Nef的表達、純化及免疫原性研究
目的:通過原核細胞表達人免疫缺陷病毒(HIV)Nef抗原,制備特異抗血清,為Nef抗原檢測提供技術方法.方法:以HIV Botswana毒株基因組為模板,用PCR法獲得Nef蛋白編碼基因,將其克隆到pET30a載體中,在大腸桿菌中表達Nef融合蛋白;用純化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠獲得抗血清,用真核表達的Nef抗原對其特異性進行分析.結果:構建的Nef融合基因在大腸桿菌中獲得表達,相對分子質量約為36x103,免疫BALB/c小鼠獲得針對融合蛋白的高效價抗血清,EUSA抗體滴度為1:6 400;免疫熒光和Western blot檢測表明,該抗血清能特異地與重組痘苗病毒表達的Nef抗原反應.結論:在大腸桿菌中表達了HIV Nef融合蛋白,制備了Nef融合蛋白的高效價小鼠免疫血清,該血清能特異性識別HIV Nef抗原,為HIV Nef抗原檢測提供了技術方法.
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