斑節(jié)對(duì)蝦酚氧化酶原在大腸桿菌中的表達(dá)

將斑節(jié)對(duì)蝦酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因克隆進(jìn)pET28a(+),在大腸桿菌BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE和Western-blotting分析均能檢測(cè)到一條分子量為79.4kDa的特異性條帶,與推導(dǎo)的融合蛋白理論分子量82.4kDa基本相符;包涵體變性后對(duì)經(jīng)Ni-NTA agarose純化的變性液進(jìn)行復(fù)性,表現(xiàn)出0.3851U/mg.min的PO活性;不同條件下的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果顯示,18℃時(shí)誘導(dǎo)培養(yǎng)能檢測(cè)到目的蛋白的可溶性表這,經(jīng)誘導(dǎo)9h后可溶性表達(dá)比例達(dá)到最高,約占茵體可溶性蛋白總量的5.56%;可溶性表達(dá)的目的蛋白純化后經(jīng)胰酶消化,可檢測(cè)到分子量為60kDa、42.7kDa的特異性條帶,并表現(xiàn)出O.4249U/mg.min的PO活性.

作 者： 韓鳳麗 貢成良 曹廣力 薛仁宇 HAN Feng-Li GONG Cheng-Liang CAO Guang-Li XUE Ren-Yu   作者單位： 蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部,江蘇蘇州,215123  刊 名： 常熟理工學(xué)院學(xué)報(bào)  英文刊名： JOURNAL OF CHANGSHU INSTITUTE OF TECHNOLOGY  年，卷(期)： 2009 23(4)  分類(lèi)號(hào)： Q344+.13  關(guān)鍵詞： 蛋白純化   proPO   原核表達(dá)   酶活性  

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