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實時熒光定量PCR快速檢測對蝦IHHNV載量方法的建立和應(yīng)用
目的:建立一種快速、定量、特異、靈敏的PCR方法用于對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒(IHHNV)的早期診斷和疫情監(jiān)測.方法:根據(jù)GenBank登錄的IHHNV毒株序列,使用生物學(xué)軟件進(jìn)行序列比對,在IHHNV保守區(qū)序列設(shè)計特異性引物與Taqman探針.對實時熒光定量PCR反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化以縮短檢測時間,提高特異性、靈敏度、重復(fù)性,并與普通PCR進(jìn)行盲樣測試的比對.結(jié)果:本法線性范圍5×102～5×107拷貝/ml,檢出限5×101拷貝/ml,靈敏度超過普通PCR100倍,特異性高于普通PCR,重復(fù)性極好(S=0.035～0.39,CV=0.13%～1.05%),檢測時間為普通PCR的1/5,現(xiàn)場盲樣IHHNV檢出陽性率高于普通PCR 26.00%.結(jié)論:本研究建立Taqman實時熒光定量PCR用于對蝦IHHNV檢測具有特異、靈敏、快速、定量、重復(fù)性好等優(yōu)點.
作 者： 王忠發(fā) 王建躍 盧亦愚 何偉賢 王學(xué)海 Wang Zhong-fa Wang Jian-yue Lu Yi-yu He Wei-xian Wang Xue-hai 作者單位： 王忠發(fā),王建躍,何偉賢,Wang Zhong-fa,Wang Jian-yue,He Wei-xian(浙江省舟山市疾病預(yù)防控制中心,浙江舟山,316000)盧亦愚,Lu Yi-yu(浙江省疾病預(yù)防控制中心,杭州,310009)
王學(xué)海,Wang Xue-hai(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物研究所,杭州,310031)
刊 名： 中國衛(wèi)生檢驗雜志 ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY 年，卷(期)： 2007 17(9) 分類號： Q75 關(guān)鍵詞： 實時熒光定量PCR IHHNV 病毒載量【實時熒光定量PCR快速檢測對蝦IHHNV載量方法的建立和應(yīng)用】相關(guān)文章：
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