重組人瘦素的基因構(gòu)建、表達及活性鑒定

根據(jù)NCBI中公布的人瘦素cDNA序列,設(shè)計并合成了6個89bp左右的DNA小片段,經(jīng)重疊延伸PCR擴增獲得464bp的rhLep的完整基因片段.構(gòu)建pET22b(+)/rhLep表達載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達.目的蛋白以包涵體的形式表達,表達量占菌體總蛋白的50%以上.表達產(chǎn)物用Ni2+親和層析柱純化,SDS-PAGE結(jié)果表明,含6×His標簽的目的蛋白的相對分子量約16kD.MTT比色法實驗顯示,當?shù)蛣┝?10～30ng/mL)時,rhLep具有促進內(nèi)皮細胞生長的作用;在高劑量(50～225ng/mL)時,rhLep具有殺傷人內(nèi)皮細胞的活性.其最大殺傷率達到98.8%.吖啶橙熒光染色觀察到高劑量rhLep對人內(nèi)皮細胞有明顯的凋亡作用.以上工作為進一步了解瘦素的體內(nèi)體外生物活性奠定了基礎(chǔ).

作 者： 吳娜 張長弓 謝蓮英 王臻 顏江華 WU Na ZHANG Chang-Gong XIE Lian-Ying WANG Zhen YAN Jiang-Hua   作者單位： 吳娜,謝蓮英,王臻,WU Na,XIE Lian-Ying,WANG Zhen(廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,廈門,361005)

張長弓,顏江華,ZHANG Chang-Gong,YAN Jiang-Hua(廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院抗癌研究中心,廈門,361005) 

刊 名： 生物工程學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(5)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 瘦素   基因構(gòu)建   表達   細胞存活率  

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