水稻精細(xì)胞cDNA文庫的構(gòu)建及分析

利用Percoll密度梯度離心和多次濾膜過濾分離到適于分子生物學(xué)研究的水稻(Oryza sativa L.cv.Guichao 2)生活精細(xì)胞.借助RT-PCR和SMART技術(shù)構(gòu)建了水稻精細(xì)胞的cDNA文庫.初級文庫的大小為1.58×106pfu,插入片段平均大小為980bp.103個隨機(jī)挑選的克隆與DIG標(biāo)記的水稻幼苗根、葉及二細(xì)胞時期花粉、成熟花粉、精細(xì)胞和授粉5～7 d的子房cDNA探針雜交表明,除少數(shù)克隆外,它們在上述器官中的表達(dá)情況很相似.10個隨機(jī)挑選的克隆用來測序及分析,有4個克隆含有完整的開放閱讀框.1個克隆與水稻Polyubiquitin(Rubql)mRNA高度同源.Northern雜交表明它在二細(xì)胞時期花粉、成熟花粉中的表達(dá)顯著少于在根、葉和授粉子房中的表達(dá).另一個克隆的開放閱讀框編碼與擬南芥(Arabidopsis thaliana(L.)Heynh.)AtRAD17同源的蛋白.這是第一次正式報(bào)道高等植物精細(xì)胞cDNA文庫的構(gòu)建,也是第一次從高等植物精細(xì)胞中分離到其表達(dá)的基因.

作 者： 茍小平 徐鶯 唐琳 顏鈁 陳放   作者單位： 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,  刊 名： 植物學(xué)報(bào)  ISTIC SCI 英文刊名： ACTA BOTANICA SINICA  年，卷(期)： 2001 43(10)  分類號： Q943.2  關(guān)鍵詞： cDNA文庫   精細(xì)胞   Rubql   AtRAD17   水稻  

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