人regucalcin cDNA高表達重組質粒的構建及其在原核細胞中的表達

目的原核表達獲得大量人regucalcin(RGN)蛋白.方法用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術從人腎皮質近曲小管上皮細胞(HK-2)中擴增RGN全長cDNA,將擴增的產(chǎn)物連接于測序載體pMD18-T,測序鑒定準確后,進行酶切,將正確的RGN全長cDNA與原核表達載體pET42b(+)構建成重組質粒pET42b(+)-RGN.將pET42b(+)-RGN先轉化入大腸桿菌DH5α,提取質粒經(jīng)雙酶切鑒定正確后,再轉化入表達宿主大腸桿菌DE3菌株.對轉化菌株進行誘導、破菌,進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)與免疫印跡分析,鑒定RGN融合蛋白質表達的正確性.RGN重組融合蛋白經(jīng)Ni2+親和層析純化,達電泳純.結果構建了重組質粒pET42b(+)-RGN并獲得高效表達,RGN重組融合蛋白經(jīng)異丙基硫化-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導后以包涵體形式存在,表達的蛋白質相對分子質量為34 000.結論人RGN蛋白在pET42b(+)原核表達載體可獲得高效表達,為進一步了解RGN蛋白質的結構、功能及其抗體的制備等奠定了基礎.

作 者： 徐洪 胡亮 倪培華 吳潔敏 趙涵芳 XU Hong HU Liang NI Peihua WU Jiemin ZHAO Hanfang   作者單位： 徐洪,胡亮,趙涵芳,XU Hong,HU Liang,ZHAO Hanfang(上海交通大學醫(yī)學院生物化學與分子生物學教研室,上海,200025)

倪培華,吳潔敏,NI Peihua,WU Jiemin(上海交通大學醫(yī)學院檢驗系,上海,200025) 

刊 名： 檢驗醫(yī)學  ISTIC PKU 英文刊名： LABORATORY MEDICINE  年，卷(期)： 2006 21(4)  分類號： Q503  關鍵詞： Regucalcin   克隆   原核表達  

【人regucalcin cDNA高表達重組質粒的構建及其在原核細胞中的表】相關文章：

雞CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表達質粒的構建04-26

表達IBDV VP2融合蛋白的重組MDV的構建及其免疫特性04-26

維甲酸受體β基因RNAi表達質粒的構建及其對A549細胞增殖和分化的影響04-27

大腸癌相關基因PGDH原核表達質粒的構建及表達04-26

銀鯽Ran基因的cDNA克隆、表達特征及其在精核解凝中的作用04-26

重組質粒pYES-GFP mRNA在動物細胞中表達的研究04-27

博爾納病病毒pEGFP-p24基因重組質粒的構建及鑒定04-27

真核表達質粒PcDNA3.1(+)-帶有Vasostatin自身信號肽的Calreticulin(120～180 aa)的構建及其在COS-7細胞中的表達04-26

HSA-sTRAIL融合蛋白的表達質粒pPICZαA-HSA-sTRAIL的構建04-26

肝臟高效表達調控元件的構建及其表達效果的鑒定04-26