哈維氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表達(dá)

根據(jù)哈維氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物,應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法,從分離自患病大黃魚的哈維氏弧菌基因組中擴(kuò)增獲得一段約800 bp的序列.將其克隆到pGEM-Teasy載體,測(cè)序結(jié)果證明該序列是哈維氏弧菌外膜蛋白OmpK基因.用PCR方法去除其信號(hào)肽序列,定向克隆到原核表達(dá)載體pGEX-4T-2構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-OmpK.IPTG誘導(dǎo)后能夠在大腸桿菌BL21中高效表達(dá)分子量約為53kD的GST-OmpK融合蛋白.用純化后的融合蛋白免疫新西蘭兔獲得了高效價(jià)的抗血清.Western-blotting分析表明,它與從哈維氏弧菌中提取的約27 kD的外膜蛋白能夠發(fā)生特異反應(yīng),提示外膜蛋白OmpK可能是哈維氏弧菌的重要保護(hù)性抗原之一.

作 者： 張崇文 于漣 毛芝娟 褚武英 錢榮華 ZHANG Chong-wen YU Lian MAO Zhi-juan CHU Wu-ying QIAN Rong-hua   作者單位： 張崇文,毛芝娟,褚武英,錢榮華,ZHANG Chong-wen,MAO Zhi-juan,CHU Wu-ying,QIAN Rong-hua(浙江大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院,浙江,杭州,310027;浙江大學(xué)動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所,浙江,杭州,310029)

于漣,YU Lian(浙江大學(xué)動(dòng)物預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所,浙江,杭州,310029) 

刊 名： 水產(chǎn)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA  年，卷(期)： 2006 30(1)  分類號(hào)： Q78 Q936  關(guān)鍵詞： 哈維氏弧菌   外膜蛋白   OmpK   原核表達(dá)  

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