促凋亡分子Bad真核表達載體構建及其在人基底細胞癌細胞中的表達

目的:克隆Bcl-2相關促凋亡基因Bad的全長編碼序列,構建Bad基因的真核表達載體并在人基底細胞癌細胞系(A431)中表達,為研究該基因在人基底細胞癌治療中的作用奠定基礎.方法:根據已發(fā)表的Bad基因的核苷酸序列設計并合成引物,用Hela細胞抽提的RNA進行逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR),擴增產物用XhoI和EcoRI雙酶切后定向克隆到真核細胞表達載體pcDNA3.1-myc中,用限制性內切酶酶切重組質粒pcDNA3.1-myc-Bad并對其DNA測定序列.用脂質體法將pcDNA3.1-myc-Bad導入人基底細胞癌細胞系A431中,G418選擇培養(yǎng), Western blot及SABC-FITC 分析鑒定其表達.瞬時轉染A431細胞,通過細胞計數和集落形成實驗觀察其對A431細胞生長的影響.結果:RT-PCR擴增出長500 bp的特異性片段,經克隆至pcDNA3.1-myc后酶切鑒定證實,并測序表明序列與GenBank報道完全一致.pcDNA3.1-myc-Bad在A431細胞中有表達并可影響細胞生長,與對照組有明顯差異.結論:成功克隆了Bad的編碼序列,構建了其真核細胞表達載體pcDNA3.1-myc-Bad,并在瞬時轉染腫瘤細胞后觀察到細胞生長受抑制.

作 者： 胡彬 封興華 劉芳 Hu Bin Feng Xinghua Liu Fang   作者單位： 胡彬,封興華,Hu Bin,Feng Xinghua(西安第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)學院口腔頜面外科,710032)

劉芳,Liu Fang(北京解放軍空軍總醫(yī)院檢驗科) 

刊 名： 實用口腔醫(yī)學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF PRACTICAL STOMATOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q786 R730.261  關鍵詞： 人Bad基因   克隆   真核表達載體   基底細胞癌  

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