洋蔥伯克霍爾德氏菌L68鄰苯二酚2,3-雙加氧酶基因克隆、表達和純化

采用自行設(shè)計的引物,從洋蔥伯克霍爾德氏菌L68中PCR擴增得到phnE(鄰苯二酚2,3-雙加氧酶)基因,亞克隆到高表達載體pET 32a上,轉(zhuǎn)入表達菌株中.經(jīng)雙向測序,證實構(gòu)建過程中未出現(xiàn)突變.重組子經(jīng)IPTG誘導后,可以表達有活性的重組雙加氧酶.選擇26 ℃進行重組蛋白誘導.薄層掃描顯示,表達重組蛋白總量最高可占總蛋白的64.92%.利用金屬螯合層析對重組蛋白進行了一步純化,SDS-PAGE結(jié)果顯示,重組蛋白純度達到95%.

作 者： 呂鵬 劉大桅 張長鎧 LUI Peng LIU Dawei ZHANG Chang-kai   作者單位： 山東大學,微生物技術(shù)國家重點實驗室,山東,濟南,250100  刊 名： 食品與生物技術(shù)學報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 25(3)  分類號： Q93  關(guān)鍵詞： 洋蔥伯克霍爾德氏菌   鄰苯二酚2,3-雙加氧酶   克隆表達   金屬螯合層析  

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