用小雙鏈RNA抑制轉化入HUVEC中綠色熒光蛋白基因的表達

目的:建立穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白(GFP)的人臍靜脈血管內皮細胞(HUVECs),研究小干擾RNA(siR-NA)對HUVECs中GFP表達的抑制作用.方法:用lipofectamine2000將編碼GFP的質粒pN3-EGFP轉入HUVECs中.用G418篩選并維持已轉化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP).利用T7RNA轉錄試劑盒,制備可抑制GFP基因表達的siRNA(GFPsiRNA)和無關對照的RNA(control siRNA).用oligofectamine將siRNA轉入HUVEC-GFP中.繼續(xù)培養(yǎng)48 h后,檢測HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表達水平.結果:用G418篩選獲得了HUVEC-GFP細胞株,可以觀察到GFP的穩(wěn)定表達.HUVEC-GFP轉化siRNA后48 h,GFP的熒光強度明顯下降,而對照組的熒光強度無明顯下降.半定量RT-PCR檢測顯示,GFPsiRNA對GFP mRNA表達有較強的抑制作用,抑制率達40%,而control siRNA對GFPmuRNA表達水平無明顯的抑制作用.結論:利用體外轉錄合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表達.

作 者： 單志新 林秋雄 余細勇 鄧春玉 鄭猛 譚虹虹 符永恒 楊敏 林曙光 SHAN Zhi-xin LIN Qiu-xiong YU Xi-yong DENG Chun-yu ZHENG Meng TAN Hong-hong FU Yong-heng YANG Min LIN Shu-guang   作者單位： 廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學研究中心,廣東,廣州,510080  刊 名： 中國病理生理雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類號： Q78  關鍵詞： RNA干擾   綠色熒光蛋白   人臍靜脈血管內皮細胞   脂質體  

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