定量RT-PCR中人干細胞因子的RNA-CRS的構建

一種適用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技術,構建人干細胞因子(hSCF)基因的RNA競爭性參考標準(RNA-CRS)的新方法:用RT-PCR技術,從HepG2細胞中擴增出全長人hSCF cDNA,并克隆入質(zhì)粒pGEM-T獲重組的pGEMSCF載體,經(jīng)ExonucleaseⅢ和S1核酸酶適當處理,以導致hSCF cDNA中一小片段缺失,由此獲得重組pGEMSCF模擬體(mimic),經(jīng)體外轉錄得到hSCF RNA-CRS.測序表明:該RNA-CRS與hSCF mRNA比較,缺失了從第499位至608位共110個核苷酸,但二者RT-PCR反應可用同一對擴增引物,反應動力學極為相似.這種hSCF RNA-CRS可作為一種較理想的競爭性參考標準,適用于定量RT-PCR中,以對重組hSCF在真核細胞中的表達水平進行準確的定量分析.此方法亦可推廣應用于其他真核基因的表達水平及/或調(diào)控的檢測和研究.

作 者： 譚文斌 聶怡玲 羅賽群 郭小珊 成光杰 陳漢春 朱定爾 TAN Wen-Bin NIE Yi-Ling LUO Sai-Qun GUO Xiao-Shan CHENG Guang-Jie CHEN Han-Chun ZHU Ding-Er   作者單位： 湖南醫(yī)科大學分子生物學研究中心,長沙,410078  刊 名： 生物化學與生物物理進展  ISTIC SCI PKU 英文刊名： PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS  年，卷(期)： 2000 27(3)  分類號： Q7  關鍵詞： 基因表達定量   定量RT-PCR   人干細胞因子基因  

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