豬圓環(huán)病毒2型核酸疫苗的構(gòu)建及其免疫效果

[目的]構(gòu)建豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)ORF2基因疫苗,并對(duì)其免疫效果和安全性進(jìn)行研究.[方法] 將PCV2 ORF2基因從pMD-ORF2*質(zhì)粒(包含PCV2 SCH A株ORF2基因)酶切回收,插入到真核表達(dá)載體pcDNA-3.1(+)中,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-ORF2,對(duì)該質(zhì)粒進(jìn)行酶切和PCR鑒定.將pcDNA-ORF2轉(zhuǎn)染IBRS-2細(xì)胞,進(jìn)行Western blotting檢測(cè).將構(gòu)建好的pcDNA-ORF2制成核酸疫苗,按100 μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小白鼠,同時(shí)設(shè)pcDNA-3.1(+),PCV2全毒和PBS為對(duì)照,共免疫2次,間隔2周.分別于首免后第14天和56天采血,用ELISA法檢測(cè)抗體;于首免后第56天,采用淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)(MTT法)和流式細(xì)胞儀(FACS)對(duì)小鼠的細(xì)胞免疫進(jìn)行檢測(cè).取首免后56 d小鼠的心肝、脾、肺、腎和腦等實(shí)質(zhì)器官,采用PCR方法檢測(cè)pcDNA-ORF2核酸疫苗的安全性.[結(jié)果] Western blotting結(jié)果顯示,pcDNA-ORF2構(gòu)建成功,并在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中獲得表達(dá).pcDNA-ORF2核酸疫苗能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答.PCV2 ORF2基因未整合到小鼠染色體上.[結(jié)論] pcDNA-ORF2可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng),其對(duì)小鼠是安全的.

作 者： 王新 郭萬(wàn)柱 周婷 徐志文 王印 王小玉   作者單位： 王新(西北農(nóng)林科技大學(xué),食品學(xué)院,陜西,楊陵,712100)

郭萬(wàn)柱,徐志文,王印,王小玉(四川農(nóng)業(yè)大學(xué),動(dòng)物生物技術(shù)中心,四川,雅安,625014)

周婷(西北農(nóng)林科技大學(xué),動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西,楊陵,712100) 

刊 名： 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF NORTHWEST A&F UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2008 36(8)  分類(lèi)號(hào)： S852.65  關(guān)鍵詞： 豬圓環(huán)病毒2型   ORF2基因   核酸疫苗  

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