大豆葉綠體轉(zhuǎn)化載體pJY系列的構(gòu)建及其在煙草上的轉(zhuǎn)化研究

為解決雜交大豆(Glycine max)制種過程中不育系易與保持系混雜的問題,開展了大豆葉綠體轉(zhuǎn)基因的研究.通過轉(zhuǎn)基因方法在不育系的細(xì)胞質(zhì)中植入篩選標(biāo)記基因,以區(qū)分不育系和保持系.根據(jù)已發(fā)表的大豆葉綠體序列(GenBank X07675)設(shè)計(jì)引物,用PCR方法獲得兩段大豆葉綠體同源重組序列LHRR和RHRR,克隆到質(zhì)粒pUC19中,并將來源于質(zhì)粒pTF102的壯觀霉素抗性基因aadA克隆到兩段同源重組序列之間,以構(gòu)建大豆葉綠體轉(zhuǎn)化表達(dá)載體pJY01.aadA基因的啟動子Prrn和終止子psbA基因3′序列,分別從煙草葉綠體基因組中擴(kuò)增而來.在此基礎(chǔ)上,將草丁膦抗性基因或綠色熒光蛋白與GUS的融合蛋白基因克隆到該載體上,得到pJY03與pJY04,并初步應(yīng)用于煙草(Nicotiana tobacum)的葉綠體轉(zhuǎn)化,獲得了具壯觀霉素抗性的綠色愈傷和幼苗,PCR擴(kuò)增出aadA基因的條帶,并在激光共聚焦掃描下檢測到GFP的表達(dá).

作 者： 陳颯 李金耀 吳平 孫寰 趙麗梅 壽惠霞 CHEN Sa LI Jin-yao WU Ping SUN Huan ZHAO Li-mei SHOU Hui-xia   作者單位： 陳颯,吳平,壽惠霞,CHEN Sa,WU Ping,SHOU Hui-xia(浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,杭州,310029)

李金耀,LI Jin-yao(浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,杭州,310029;新疆大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,烏魯木齊,830046)

孫寰,趙麗梅,SUN Huan,ZHAO Li-mei(國家轉(zhuǎn)基因植物中試與產(chǎn)業(yè)化基地,公主嶺,136100) 

刊 名： 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 14(6)  分類號： S188  關(guān)鍵詞： 大豆   葉綠體轉(zhuǎn)化   表達(dá)載體   GFP  

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